呼吸道感染病原学检验标本的规范采集和送检，使实验室“难培养的细菌”的分离率得到大幅度的提高，检验结果为临床提供了切实有用的信息。

流感嗜血杆菌和肺炎链球菌是引起免疫力低下者和婴幼儿童呼吸道感染的重要的病原菌。两菌对外界环境敏感、初代培养会受其他细菌的抑制而影响生长，是苛养性（兼性厌氧性）细菌，分离鉴别较困难，造成分离率降低，又称为“难培养的细菌”，不同实验室分离率差异很大，引起的感染发病率一直难以估计。

金平县人民医院在儿科开展呼吸道感染患儿病原学筛查工作后，“难培养的细菌”流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的实验室分离力得到了大幅度的提升，两菌的分离率获得了突飞猛进的提高，检验结果为临床提供了切实有用的信息。

2022年1月起，金平县人民医院儿科在呼吸道感染患儿入院后、在使用抗菌药物治疗前，用一次性无菌吸痰器和一次性无菌棉拭子采集呼吸道感染患儿的呼吸道标本并立即运送至实验室申请作呼吸道感染病原的培养筛查，使实验室获得了“合格的具有代表性的”呼吸道感染病原学检验的“大样本”。

经培养分离鉴定，金平县人民医院2022年流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的实验室现在分离率分别为流感嗜血杆菌4.45%（100/2249）、肺炎链球菌4.67%（105/2249）。其中成人患者中流感嗜血杆菌的检出率为1.63%、肺炎链球菌的检出率为2.11%；呼吸道感染患儿中流感嗜血杆菌检出率是12.41%、肺炎链球菌检出率是11.90%；患儿双菌感染率为1.70%（10/588）。

经过近9年的微生物检验工作的回顾跟踪，金平县人民医院婴幼儿童呼吸道感染病原学检验标本从历年的“未送检”到了现在的“适时合理规范采集和即时的送检”、住院呼吸道感染患儿抗菌药物治疗前病原学送检率于2022年1月打破了“零”的历史、“难培养的细菌”—流感嗜血杆菌、肺炎链球菌的检出从“无”到“有”、检出率突然从“0”跃到“10”。经比较，两菌的现在检出率是成人患者的7倍和5倍（P＜0.005）。

通过对“合格的具有代表性的大样本”进行培养分离鉴定，实验室感受了流感嗜血杆菌、肺炎链球菌的培养特性、镜下特征和确认试验结果的“见多识广”的体验，进一步提升了对苛养性细菌的鉴定分离技术水平，大幅度的提高了“难培养的细菌”的分离力，推动了成人患者中两菌的检出率。经比较，2022年成人患者两菌的检出率是往年（前8年）两菌的平均检出率（0.15%和0.91%）的10倍和2倍（P＜0.05）。

临床科室病原学检验标本的适时合理规范采集和即时送检，提高了住院患者抗菌药物治疗前病原学的送检率，有效改进了《2022年国家医疗质量安全改进目标》之“提高住院患者抗菌药物治疗前病原学送检率”的工作目标；同时提高了实验室“难培养的细菌”的分离力和分离率，精准的实验室结果提示了“难培养的细菌”引起呼吸道感染发病的现状和感染发病的人间分布，为临床提供了科学的诊疗依据，有效提高了抗菌药物使用的科学性和规范性，为临床提供了切实有用的信息。

“难培养的细菌”—流感嗜血杆菌、肺炎链球菌的生物学特性和临床检测意义：

流感嗜血杆菌  苛养性细菌。寄生于人咽喉及口腔粘膜。培养嗜二氧化碳或微需氧，仅在巧克力琼脂培养基上生长，镜下为革兰氏阴性短杆菌或球杆菌。

肺炎链球菌 兼性厌氧菌。寄生于人上呼吸道，培养需要5%～10%的二氧化碳参与，培养基上菌落通常呈脐窝状，镜下为革兰氏阳性双球菌。

流感嗜血杆菌和肺炎链球菌对外界环境均比较敏感，会在短时间内死亡（自溶）、对抗菌药物普遍敏感、初代培养会受其他细菌的抑制而影响生长，分离鉴别困难，造成分离率低，又称为“难培养的细菌”。

两菌都能在人类的上呼吸系统中寄生，一项有关它们之间的竞争研究指出，在培养基内，肺炎链球菌能以过氧化氢攻击流感嗜血杆菌及能排除在表面流感嗜血杆菌生存所需的分子。当流感嗜血杆菌被肺炎链球菌攻击时，会引发免疫系统攻击肺炎链球菌，故当两种细菌一同在鼻腔内时，两星期之内，只有流感嗜血杆菌能够生存，当两种细菌分别地放在鼻腔内时，两者皆能生存。两者都会引起肺炎、支气管肺炎、咽喉炎、中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、结膜炎、角膜炎、脑膜炎等，是引起呼吸道及眼部感染的重要的病原菌，主要感染对象为免疫力低下者和婴幼儿童。流感嗜血杆菌还可引起严重的继发感染。两菌的结合会引发只有其中一种细菌存在时所不会引发的免疫系统的警报。

病原学检验标本的采集方法与时机、标本的保存与运送方式、实验室的环境技术条件是影响苛养性细菌分离率的主要因素，不同医院实验室对“难培养的细菌”的分离率差异很大，两菌引起的感染发病率一直难以估计。

因此，对“难培养的细菌”—流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的培养分离鉴定和药敏试验是临床诊疗迫切的需要；分离力和分离率则是衡量一个临床微生物实验室技术水平的重要标志。